高通量顿厂贵分析仪在生物药物研究、蛋白质稳定性分析等领域有着广泛的应用,DSF,即差示扫描荧光法(Differential Scanning Fluorimetry),是一种基于蛋白质热变性过程的荧光检测方法。它通过在荧光定量PCR仪上缓慢加热样品,并在加热过程中检测荧光信号的变化来评价蛋白质的热稳定性。根据荧光信号来源的不同,DSF可以分为两类:染料法和无标记法(Nano DSF)。
染料法:常用的荧光染料是SYPRO Orange。这是一种环境敏感的疏水染料,当温度升高时,蛋白去折叠,疏水部分暴露出来,染料与蛋白质的疏水部分特异性结合,导致荧光增强。通过监测荧光强度的变化,可以计算出蛋白质的熔解温度(Tm)。
无标记法(Nano DSF):这种方法基于蛋白去折叠过程中色氨酸发射光谱的位移进行检测。色氨酸残基在蛋白质疏水内核中时,其内源荧光发射波长较短;而当蛋白质去折叠,色氨酸暴露于亲水环境时,其内源荧光发射波长会发生红移。通过监测这种荧光变化,可以在非标记环境下评估蛋白质的热稳定性。
高通量顿厂贵分析仪结合了DSF技术的优势,并实现了高通量分析。其主要特点包括:
高通量:采用标准的384微孔板,一次实验可以分析多个样品,大大提高了分析效率。
快速分析:一个升温过程(如60-80分钟)内即可完成384个样品的稳定性分析与筛选。
无需特殊耗材:使用标准的384孔板,无需特殊的耗材和毛细管,降低了实验成本。
内源荧光检测:Nano DSF方法无需对待测样品进行任何标记,也无需使用任何荧光探针,即可快速测量整块样品微孔板。
高通量顿厂贵分析仪在多个领域都有广泛的应用,包括但不限于:
蛋白质稳定性分析:评估蛋白质在不同条件下的稳定性,如温度、辫贬值、离子强度等。这对于理解蛋白质的结构与功能关系、优化蛋白质药物的生产和储存条件具有重要意义。
药物筛选:通过高通量筛选技术,快速筛选出与靶蛋白结合的候选药物。这有助于加速药物研发进程,提高药物筛选的效率和准确性。
蛋白质结构研究:研究蛋白质的结构和构象变化,为蛋白质结晶等研究提供有力支持。顿厂贵技术可以揭示蛋白质在不同条件下的结构变化,为理解蛋白质的功能和机制提供重要线索。